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ABI PCR擴增儀沒有信號故障維修

2021-08-13 15:44:21新聞中心

  ABI PCR擴增儀沒有信號故障維修:PCR 用戶有時會遇到實時 PCR 實驗的問題。它們的實時 PCR 曲線沒有給出信號,或者它們在陰性對照中與信號復雜化。我們將盡力幫助用戶解決您的 PCR 問題的主要原因以及如何解決這些問題。

  ABI PCR擴增儀沒有信號故障維修分析:

  PCR 中沒有模板。您的ABI PCR 中沒有信號似乎是一個微不足道的原因,但請務必再次檢查您是否已將模板添加到您的 PCR 中。這有時可以幫助您節省解決問題的時間和精力。PCR中有抑制劑。您的模板可能包含導致ABI PCR 不良的抑制劑,例如鹽、SDS、苯酚、植物和人體組織或體液。解決方法:使用添加劑(BSA、DMSO、甜菜堿等)來增強您的 PCR 是合適的。下一個選項是使用內部陽性對照,可以檢查 PCR 的正確性。探頭質量或設計有問題。由于大量凍融循環或錯誤的長期儲存,探頭可能會部分退化。Generi Biotech 中合成的探針可進行 50 次凍融循環。也有可能是探針設計不當,沒有與擴增產物結合。

  如果陰性對照(或無模板對照)中有陽性信號,則可能存在以下一些問題:

  您可能已將模板添加到您的 NTC 反應中。請重復分析以排除此問題。引物和探針設計存在問題。您的引物和探針可能會產生二聚體,而您的ABI PCR 在分析中會產生假陽性信號。嘗試通過電泳或熔解分析來檢查您的 PCR 產物。

  ABI PCR擴增儀沒有信號故障維修注意事項:

  PCR 的靈敏度要求樣品不受任何外源 DNA 或實驗室環境中任何先前擴增的產物的污染。我們建議使用不同的區域進行樣品制備、PCR 設置和 PCR 后分析。建議使用配備紫外線燈的層流柜來制備反應混合物。應建立兩個物理上相互分離的站點。建立一個僅用于 PCR 反應設置的“pre-PCR 區域”。不應將“PCR 后區域”的物品引入該區域;這包括筆記本和鋼筆等物品。建立一個“PCR 后區”,用于ABI PCR、純化 PCR 擴增的 DNA、測量 DNA 濃度、運行瓊脂糖凝膠和分析 PCR 產物。設備也應限制在這些區域。PCR 儀和電泳儀應位于 PCR 后區域。強烈建議使用帶有氣溶膠過濾器的移液器和移液器吸頭,僅用于 DNA 樣品和反應混合物的制備。其他建議包括:為ABI PCR 前和 PCR 后區域配備單獨的移液器和移液器吸頭、實驗室外套、手套箱和廢紙簍。標記 PCR 前和 PCR 后項目,因此它們不會從其指定的工作區域中移除。遵循 PCR 的黃金法則:切勿將ABI PCR 后區域中使用的任何試劑、設備或移液管帶回 PCR 前區域。單獨準備和儲存ABI PCR 試劑,并僅將它們用于指定目的。試劑應分小份并儲存在指定區域,具體取決于它們是用于ABI PCR 前還是 PCR 后應用。等分試樣應與其他 DNA 樣品分開存放。應始終執行省略模板 DNA 的對照反應,以確認不存在污染。此外,ABI PCR 循環的次數應保持在低限度,因為高度敏感的檢測更容易受到污染的影響。

 

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